犬松弛素（RLN-6B6）質(zhì)控品目前對松弛素基因的研究主要集中在人、小鼠、豬等物種上,國外已克隆了犬前松弛素原(preprorelaxin)的基因序列,鑒于此,本研究以犬胎盤、卵巢組織為材料,應(yīng)用RT-PCR技術(shù)獲得多條犬前松弛素原基因cDNA,進行克隆并作生物信息學(xué)分析,同時構(gòu)建犬松弛素原(prorelaxin)原核表達載體,轉(zhuǎn)化入大腸桿菌中,使其表達相應(yīng)蛋白質(zhì)。再將表達的重組蛋白免疫新西蘭兔以制備多克隆抗體。上述方法大程度的推動了松弛素的結(jié)構(gòu)和功能的研究。本研究具體如下：1、犬前松弛素原基因的克隆和生物信息學(xué)分析本研究以北京犬和吉娃娃新生胎盤、貴賓犬卵巢為材料,采用RT-PCR技術(shù)擴增前松弛素原基因,結(jié)果顯示：本實驗完整克隆了從所獲樣品中擴增到的預(yù)期大小目的片段,包含一個534bp的開放閱讀框,編碼177個氨基酸。將所擴增片段進行序列分析顯示,與NCBI核酸數(shù)據(jù)庫檢索的犬preprorelaxin的cDNA序列同源性為99.6%,均有3個核苷酸位點發(fā)生改變,從而引起相應(yīng)氨基酸改變,但并未引起蛋白結(jié)構(gòu)的變化。進化樹分析結(jié)果顯示,所獲三條目的片段同為一支,與貓preprorelaxin基因的進化距離近。生物信息分析顯示,3條序列等電點、帶電荷數(shù)、氨基酸、消光系數(shù)、半衰期、不穩(wěn)定系數(shù)一致,分子式分子量、不穩(wěn)定系數(shù)、脂肪系數(shù)、總平均疏水指數(shù)有細微差異；跨膜區(qū)、信號肽、糖基化位點分析結(jié)果一致：二級結(jié)構(gòu)組成一致,包含α-螺旋、延伸鏈、無規(guī)則卷曲,比例存在細微差異。

犬松弛素（RLN-6B6）質(zhì)控品

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