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信帆生物:ELISA試劑盒的組成
更新時(shí)間:2025-04-23   點(diǎn)擊次數(shù):52次

 信帆生物提供高靈敏度,特異性好,即用型的ELISA試劑盒,長(zhǎng)期與全國各大高校合作,引用文獻(xiàn)上千篇。

ELISA試劑盒包含預(yù)包被酶標(biāo)板、檢測(cè)抗體、鏈酶親和素標(biāo)記的HRP、標(biāo)準(zhǔn)品、TMB顯色液、終止液、洗液、封板膜、檢測(cè)緩沖液等10個(gè)成分。

信帆生物:ELISA試劑盒的組成

ELISA
在操作前試劑和組分都先恢復(fù)到室溫,標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品,建議做復(fù)孔。ELISA緩沖液配制
吸取5毫升10x Assay Buffer緩沖液,至50ml離心管,吸取50ml20x洗液至1升量筒,加蒸餾水至1000毫升。
加樣注意事項(xiàng):
取出已恢復(fù)至室溫的酶標(biāo)板,加入300微升洗液,以洗去包被抗體保護(hù)劑,使包被抗體處于最佳活性狀態(tài),靜置浸泡30秒。洗板結(jié)束后,立即使用酶標(biāo)板,不要讓酶標(biāo)板干燥。
排版布局H1H2孔為空白孔,A1A1G1G2為標(biāo)準(zhǔn)曲線的S1S7孔,每孔加入50微升的Assay Buffer,根據(jù)排版,每孔加入50微升標(biāo)準(zhǔn)品和樣本,加樣時(shí),垂直懸空加入液體,加完后槍頭輕輕碰液面(建議標(biāo)準(zhǔn)品,樣本都做復(fù)孔),最后每孔加入50微升檢測(cè)抗體,加完后用封板膜小心封好酶標(biāo)板,為讓抗原抗體充分接觸。

洗滌注意事項(xiàng):

洗滌在ELISA過程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟,但卻決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,而在洗滌時(shí)應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。可以說在ELISA 操作中,洗滌是主要的關(guān)鍵技術(shù),應(yīng)引起操作者的高度重視,操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌,不得馬虎。

計(jì)算方法:

檢測(cè)完成后,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度做為縱坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的吸光度(OD值)作為橫坐標(biāo),利用計(jì)算機(jī)軟件,采用四參數(shù)Logistic曲線擬合(4-pl),創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線方程,通過樣本的吸光度(OD值),利用方程計(jì)算樣品的濃度值。如果樣品被稀釋,通過上述方法測(cè)的的濃度值,要乘以稀釋倍數(shù),才是樣品的終濃度。

 抄筆記總結(jié):

1.  從室溫平衡60min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

3.  待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;

4.  隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

信帆生物是專業(yè)的ELISA試劑盒供應(yīng)商,提供大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,人ELISA試劑盒等等,產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定,庫存充足,價(jià)格實(shí)惠,深受廣大科研用戶青睞。

 

 

   

 


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